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干细胞因子（SCF，又称Kit配体或肥大细胞生长因子）是Ⅰ型跨膜蛋白，其可溶方式由蛋白酶切产生，是c-Kit受体（CD117）的仅有已知配体。SCF与c-Kit的结合激活下流PI3K/AKT、MAPK/ERK及JAK/STAT等多条信号通路，对造血干细胞/祖细胞的生计、增殖、自我更新及发动至关重要。该通路相同调控黑素细胞发育、生殖细胞保持和胃肠道Cajal间质细胞功用。
SCF/c-Kit信号通路的失调与多种疾病相关，包含干细胞衰竭、色素性疾病、胃肠道间质瘤（GIST）及部分白血病。因而，取得高纯度、高活性的重组SCF蛋白，关于深入研讨该通路的分子机制、开发靶向药物以及优化干细胞体外培育体系具有无法代替的价值。SCF His Tag重组蛋白作为一种规范化的研讨东西，经过交融6x组氨酸标签，完成了高效纯化与灵敏运用。
蛋白方式：一般为重组人SCF的可溶胞外域片段，以非共价结合的同源二聚体方式存在，这是其激活c-Kit受体所必需的结构。
标签规划： 在蛋白的N端或C端交融一个6x组氨酸标签（6xHis Tag）。该标签为后续的固定化金属亲和层析纯化供给了通用、高特异性的结合位点，一起便于经过抗His抗体进行细心的检测和固定化。
主要在大肠杆菌（E. coli）体系中表达，以取得高产量、低成本的无糖基化蛋白；或在线细胞）中表达，以取得具有哺乳动物样糖基化润饰的蛋白，其性质更挨近天然方式，可能在体内具有更优的药代动力学特性。
运用固定化金属亲和层析（IMAC） 作为中心纯化过程。SCF His Tag蛋白经过其His标签与填充柱内的镍离子（Ni²⁺）或钴离子（Co²⁺）产生配位结合，在洗刷去除杂蛋白后，运用含有竞争性配体（如咪唑）的缓冲液将其高纯度洗脱。后续一般结合分子筛层析以去除聚集体，保证取得具有正确二聚体构象的高均一性产品。
体外培育增加剂：作为要害的细胞因子，用于保持造血干细胞、祖细胞以及肥大细胞在体外的存活、增殖和集落构成，是骨髓和脐带血干细胞培育体系的中心组分。
功用机制研讨：用于探求SCF/c-Kit信号在干细胞命运决议（如自我更新与分解平衡）中的详细效果机制。
结合动力学剖析： 经过外表等离子共振（SPR）或生物膜干与技能（BLI），将SCF His Tag蛋白固定于传感器芯片，定量剖析其与c-Kit受体胞外域的相互效果，测定结合动力学参数（Kon， Koff， KD），评价骤变或药物干涉的影响。
小分子抑制剂/激动剂挑选：作为规范靶点蛋白，用于树立高通量挑选模型，寻觅可以增强或阻断SCF/c-Kit相互效果的候选药物，运用于癌症（如GIST）或再生医学范畴。
功用康复试验：在c-Kit信号通路缺点的细胞模型或原代细胞培育中，增加重组SCF His Tag蛋白，以验证或抢救特定的表型。
信号通路协同效果研讨：与FLT3配体、TPO、EPO等其他细胞因子联用，研讨其在造血过程中的协同效应。
高纯度与高比活性：严厉的纯化工艺保证蛋白纯度一般高于95%，内毒素水平低，适用于灵敏的细胞培育试验。
标签带来的操作通用性：His标签使该蛋白不只易于纯化，还可快捷地用于Western Blot检测（运用抗His抗体）、免疫沉淀，或定向固定于各类外表用于互作研讨。
清晰的蛋白来历与质量操控： 商品化的SCF His Tag蛋白供给清晰的序列、表达体系和活性数据（一般以ED50表明），保证了不同试验批次间的成果可比性和可重复性。
二聚体活性：SCF的生物学功用依赖于其二聚体方式。在贮存和操作的流程中需防止强变性条件，以防止二聚体解离导致活性损失。
糖基化差异：挑选大肠杆菌或真核体系表达的蛋白时，需考虑糖基化差异对蛋白稳定性、体内半衰期及特定细胞类型反响性的潜在影响。关于大多数体外功用试验，两者一般均适用。
贮存与运用：推荐在含有载体蛋白（如BSA）的缓冲液中分装，于-80°C长时间保存，防止重复冻融。运用前主张时间短离心，并在冰上溶解。
SCF His Tag重组蛋白是研讨c-Kit受体信号通路、探究干细胞生物学以及开发相关再生疗法与肿瘤医治战略的根底东西。其规范化的His标签规划，将这一要害生长因子的出产和运用流程极大地简化与一致。它为研讨人员供给了：
规范化的分子探针：用于定量解析SCF/c-Kit相互效果的生物物理特性及调控机制。
跟着对干细胞生物学和肿瘤微环境研讨的不断深入，该蛋白在根底科研和转化医学中的运用价值将继续凸显。
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